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G418 Sulfate (Geneticin) 遗传霉素货号:X10017~X10019 品牌:XYbio CAS号:108321-42-2 ![]()
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商品说明
商品参数
订购信息:
使用说明: 1. G418储存液的配制(50 mg/mL,活性浓度) 1)活力单位的换算 根据此公式进行换算:(1000/A0)×A1=A2,其中A0是G418的活力值(Potency),因批次而异。可见批次对应的质检报告,或者瓶子上的标签。A1是想配制的活性G418浓度。A2是实际称重的粉末与体积比浓度。 比如若所用批次的G418 活力值为:750 μg/mg,要配制50 mg/mL的G418活性浓度,则实际要配制的粉末浓度为1000/750×50 mg/mL=66.33 mg/mL。 如果配制10 mL的G418储存液(活性浓度,50 mg/mL),则需要称取663.3 mg粉末。 2)除菌和保存 根据上述换算得到的实际粉末称重量,加入10 mL无菌去离子水内使其完全溶解。 先用5 mL无菌去离子水预湿润0.22 μm针头式过滤器,除尽水。之后使用此滤器过滤,除菌后分装成单次使用的小量(如1mL)放到-20℃冻存,1年稳定。 ②不建议使用液体培养基,NaCl,磷酸盐溶液或者有机溶剂来制备储存液。
2. 常用筛选浓度 一般来说,刚开始筛选转化子需要高浓度的G418,并用一个较低浓度的G418用于维持培养。生长条件,细胞类型和其他的环境因素都可能影响G418的用量,因此*次使用的实验体系建议通过杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定*佳筛选浓度。 通常情况,哺乳动物细胞筛选范围200-2000 μg/mL;植物细胞:10-100 μg/mL;酵母细胞:500-1000 μg/mL。
以下是一些细胞类型使用G418筛选使用的浓度,可做参考:
3. 杀灭曲线的建立 为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素*低浓度,可通过建立杀灭曲线来实现,至少选择6个浓度。处理分裂期的细胞时G418的活性*强,因此在添加G418之前需要让细胞培养一段时间。 1) *天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2培养过夜。 【注】:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。 2) 根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定0,50,100,200,400,800,1000 μg/mL。 3) 第二天:去除旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。 4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。 4. 稳定转染细胞的筛选 1) 转染48 h后,用含有适当浓度的G418筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。 2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。 4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35 mm细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。 5) 之后更换正常培养基培养即可。
注意事项: 1) 本品不可高压灭菌; 3) 配制G418溶液时,一定要根据G418批次不同的活力值(potency)来进行换算,从而得到需要活性浓度的储存液及工作液。 5) 即使加入杀死剂量的G418,细胞可能会继续分裂2-3次。G418的药效通常在2天后才变得明显。 6) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅供科研使用,不可用于临床诊断应用或其他用途。 |